Жили-были на белом свете сестрица Аленушка и ее младшенький брат Иванушка. Отправились они однажды в поле, а когда возвращались домой, Иванушка захотел пить. Попробовал он было испить воды из лужи в форме копытца, но Аленушка остановила его, иначе превратился бы мальчик в жеребенка. Один раз отвела сестрица беду, второй, а на третий раз Иванушка все-таки напился воды из другой лужицы и обратился в козленка. На этом несчастья героев не закончились: похитила Иванушку-козленочка злая Баба-Яга. Немедленно Аленушка бросилась на поиски братца, но проклятая ведьма утопила ее в заколдованном пруду. Кто же поможет брату и сестре спастись и освободиться от недобрых чар?

• Мультфильм снят по мотивам одноименной русской народной сказки. 
• Режиссер анимационного фильма Ольга Ходатаева в своем творчестве не раз обращалась к фольклорным сюжетам. В числе ее работ – мультфильмы «Лиса, Заяц и Петух» (1942), «Чудо-мельница» (1950), «Золотые колосья» (1958). 
• В 1958 году сказка «Сестрица Аленушка и братец Иванушка» с иллюстрациями из мультфильма вошла в сборник «Фильмы-сказки: сценарии рисованных фильмов». 
• В 2001 году анимационный фильм был отреставрирован и переозвучен современными актерами. Однако качество реставрации и дубляжа было негативно воспринято как зрителями, так и профессионалами.